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脾單核細胞分離實驗

簡要描述:脾單核細胞分離實驗是達為科生物細胞平臺的基礎(chǔ)服務(wù)項目之一,由專業(yè)的實驗技術(shù)人員操作完成。

  • 更新時間:2022-12-22
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詳細介紹

脾單核細胞分離實驗操作方法:

采用頸椎脫臼法處死小鼠,于75%的酒精中浸泡10-15min;
在無菌超凈臺內(nèi)分離脾臟,放入PBS溶液(按照1:50的比例加入雙抗)中清洗2遍;
將清洗后的脾臟組織轉(zhuǎn)移至離心管中,加入適量的RMPI-1640培養(yǎng)基,用剪刀將其剪碎成糜狀;
將剪碎后的組織經(jīng)200目的濾網(wǎng)過濾,得到脾細胞懸液;
另取一個離心管,先加入與細胞懸液等量體積的淋巴細胞分離液,之后將細胞懸液輕輕加到離心管的淋巴細胞分離液上層(注意45度傾斜沿管壁滴加,一定要緩慢否則懸液沉下去導(dǎo)致分層界面不明顯);
3000rpm離心10min,離心完畢后吸取中間白膜層即為脾單個核細胞;
3000rpm離心10min,加入RMPI-1640培養(yǎng)基進行洗滌一次;
用紅細胞裂解液去除紅細胞;3000rpm離心10min,再次用RMPI-1640培養(yǎng)基進行洗滌一次;
洗滌結(jié)束后,所得細胞沉淀用RMPI-1640培養(yǎng)基重懸后進行細胞計數(shù)。

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